In vitro исследования это

In vitro исследования это

Диагностика осуществляется комплексно и включает ряд последовательных этапов: сбор аллергологического анамнеза, общее клинико-лабораторное обследование, специфическая клиническая аллергодиагностика in vivo (проведение кожных проб и/или провокационных тестов с аллергенами), иммунологическое и аллергологическое лабораторное обследование in vitro. И если за последние десятилетия сбор анамнеза, методы клинического обследования, методики кожных и провокационных тестов изменились незначительно, то в области лабораторной диагностики аллергии произошли революционные изменения. Стали совершенствоваться методы аллергодиагностики in vitro, прежде всего определение специфических иммуноглобулинов Е (IgE).

Одной из важнейших диагностических проблем является сопоставление клинической и лабораторной информации о больном аллергией. Данное сравнение выявляет достаточно большой процент несовпадений, который иногда трактуется односторонне: как «правильность» данных клинической специфической диагностики и ошибку при лабораторной специфической диагностике, либо наоборот — «правильность» лабораторных данных и неспецифичность клинических.

Хотя данная проблема регулярно становится темой для обсуждения, тем не менее этот вопрос возникает неоднократно как у врачей-специалистов, так и у пациентов, и требует пояснения.

Во-первых, одним из важных методических аспектов является правильное сопоставление результатов кожного и лабораторного тестирования. Что значит правильное? Результаты можно сравнивать, если они получены в отношении идентичных, либо очень сходных аллергенов. Характеристики аллергенов, полученных различными способами, из различного исходного сырья, с различной степенью очистки и т. д., могут в некоторой степени отличаться друг от друга и, соответственно, существенным образом влиять на результаты. Несмотря на определенные достижения в стандартизации аллергенов остается проблема в создании стандартов и унификации аллергенов на основе единых эталонов.

Также на частоту возникновения ложноотрицательных/ложноположительных результатов безусловно влияет правильность выполнения методики проведения теста, например, нарушение техники введения при кожном тестировании, повышение дозы аллергена, расстояние между аллергенами менее 2,5 см и изменение свойств аллергенов при неправильном хранении или изготовлении, использованных при тестировании, как in vivo, так и in vitro.

Во-вторых, несовпадение результатов кожных проб и содержания специфических IgE связано с более сложными механизмами формирования кожной реакции. IgE в крови присутствуют в низких концентрациях, достаточно быстро выводятся, и их повышенный уровень обычно наблюдается при текущем контакте с аллергеном. В тканях же (в частности, в коже), напротив, связанные с тучными клетками IgE сохраняются в течение срока жизни клеток — от нескольких дней до нескольких месяцев. С этим фактором также могут быть связаны некоторые случаи расхождения результатов серологических тестов и кожных проб при тестировании реактивности к идентичным аллергенам.

В-третьих, клинические реакции у больного могут быть обусловлены высоким местным синтезом специфических IgE, при этом их содержание в периферической крови может измениться незначительно. Кроме этого специфические IgE могут быть частично блокированы анти-IgE-антителами класса IgG, образуя иммунные комплексы. Специфические IgE из этих комплексов становятся недоступны при определении рутинными методами ИФА, что естественно может сопровождаться ростом ложноотрицательных результатов.

Вышеперечисленные причины безусловно не единственные, влияющие на расхождение результатов клинических и лабораторных тестов.

Одна из причин расхождения результатов, как при тестировании in vivo, так и in vitro, может быть связана с иммунным ответом (до 10%) на минорные аллергены, входящие в сложный состав нативных экстрактов. Cенсибилизация к минорным аллергенам и низкий уровень свободных специфически реагирующих IgE могут обуславливать повышение частоты возникновения ложноотрицательных результатов.

Причиной ложноположительных результатов при тестировании in vitro могут быть перекрестные реакции между аллергенами различных групп (особенно часто ингаляционными и пищевыми), повышенный уровень общего IgE, создающий возможность низкоаффинного связывания части общих IgE, имеющих гомологичные эпитопы, сходные с таковыми у специфических к определенному аллергену IgE.

Ряд перекрестных реакций между аллергенами также может привести к повышению уровня ложнопозитивных результатов кожного тестирования при клинической диагностике сенсибилизации к некоторым пищевым аллергенам (реакции на пшеницу, рыбу, сою).

Важную роль при постановке кожных тестов играют возраст пациента, общее состояние и наличие сопутствующих заболеваний, прием антигистаминных препаратов, индивидуальная реактивность кожи, а также изменение иммунореактивности при развитии острых и активации хронических заболеваний. Все эти факторы также могут стать причиной несовпадения с результатами лабораторных тестов.

Но всегда нужно помнить, что обнаружение аллергенспецифических IgE (к какому-либо аллергену или антигену) выявляет только сенсибилизацию и еще не доказывает, что именно этот аллерген является причиной аллергического заболевания.

Окончательное заключение и интерпретация лабораторных данных должны быть сделаны только специалистом-аллергологом на основании сопоставления результатов лабораторных исследований с клинической картиной, данными аллергологического анамнеза и дополнительных методов исследований.

Аллергены домашней пыли

Аллергия на домашнюю пыль — одна из самых распространенных видов аллергии. Самой частой причиной развития аллергической бронхиальной астмы и круглогодичного ринита является аллергия на домашнюю пыль.

Домашняя пыль — это естественный продукт человеческого быта. По своему составу она неоднородна и является сложным аллергеном, состоящим из множества различных элементов, таких как микроклещи, которые питаются частицами эпидермиса людей и животных, фрагменты перьев, шерсти и перхоти животных, волосы и эпидермис человека, споры плесневых грибов и бактерий, частицы насекомых и т.д. Экстракты домашней пыли обладают высокой аллергенной активностью.

Greer Labs., Inc
Лаборатория-производитель экстракта аллергена домашней пыли, известном во всем мире под шифром h1. Ее наиболее важными компонентами являются клещи семейства Pyroglyphidae (Dermatophagoides farinae, Dermatophagoides pteronyssinus и т.д.), частицы эпидермиса и шерсти животных, элементы насекомых.

Компания «Алкор Био» производит еще три вида пылевых аллергенов, таких как h0, h2, h3. Все они также являются сложными многокомпонентными аллергенами. Но h0 в отличие от h1 в большей степени содержит элементы плесневых грибов и их споры и в меньшей частицы насекомых. А вот h2 помимо всех основных компонентов в своем составе содержит значительное количество текстильных элементов, в частности, набивок для матрацев, одеял и материалов, использующихся для обивки мебели. Что касается аллергена библиотечной пыли h3, то в его состав входят элементы древесной целлюлозы, использующейся для производства бумаги и, соответственно, сами частицы «старой» бумаги, а также элементы плесневых грибов, тараканов и др. насекомых.

Конечно, любой из предложенных аллергенов домашней пыли может служить хорошим маркером аллергической реакции. Тем не менее, для определения повышенной чувствительности к домашней или библиотечной пыли, можно при назначении врачом руководствоваться этими различиями в составе аллергенов для выявления специфической реакции преимущественно к определенной группе элементов.

Аллерген эпителия животного

Аллергия к домашним животным — актуальная проблема современной аллергологии и клинической иммунологии. Домашние животные являются одним из сильнейших источников аллергенов. Ученые объясняют увеличение распространенности аллергии к домашним животным тремя основными причинами: значительным ростом семей, имеющих дома животных, тесным контактом человека с сельским/агропромышленным хозяйством и его профессиональной деятельностью. Немаловажное значение имеет также существенный рост численности грызунов повсеместно.

Аллергены животных включают белки следующего происхождения: шерсть, эпителий, перхоть, слюна, моча и перья (у птиц).

Существует огромное заблуждение, что аллергию вызывает исключительно шерсть животных. Это не совсем так. Сама шерсть животных не обладает значительными аллергенными свойствами, однако выраженная аллергенность связана с прикреплёнными к шерсти белками эпидермиса и слюны.

Эпителий животных, представляющий собой клетки наружного кожного слоя, является основным аллергеном этого животного и выступает как важный источник большого количества высокоантигенных и аллергенных частиц.

Чешуйчатое шелушение (отслаивание) эпителия, это постоянный процесс у всех животных. Для обозначения слущенного эпителия употребляют термин перхоть. Перхоть также является источником высокоактивных аллергенов.

Значительные количества белков, прежде всего ферменты, содержит слюна животных.

Что же лучше использовать для диагностики аллергических реакций — эпителий или шерсть животных, — рассмотрим на примере аллергенов кошки и собаки.

Самыми мощными аллергенами являются аллергены кошек. На сегодняшний день описано более 12 аллергенных белков кошек. Так называемый главный аллерген белок Fel d 1 обнаружен в эпителии кожи, а также в секрете сальных желез, но не в слюне кошек. Более 80% больных с аллергией на кошек имеют специфические IgE-антитела именно к этому гликопротеину. Тогда как к сывороточному альбумину Fel d 2, который содержится в сыворотке крови, перхоти и слюне, чувствительны только около 25% людей.

По некоторым данным результатов кожных проб у детей с бронхиальной астмой и аллергическим ринитом по определению сенсибилизации к аллергенным белкам кошки на примере использования аллергенов из шерсти и эпителия производства компании Allergopharma было выявлено, что диагностическая значимость аллергена из эпителия кошки существенно выше (55%), чем у аллергена шерсти (11%).

Такая же тенденция наблюдается и относительно аллергенов собаки. Многие люди ошибочно полагают, что у них имеет место аллергия на собачью шерсть, однако на самом деле виновником является не шерсть, а мелкие частички омертвевшей кожи или эпителия собаки.

Основные аллергены собак Can f 1 и Can f 2 выделены из собачьей перхоти и эпителия. Но тем не менее для диагностики аллергии к собаке важно определить три аллергена: перхоть, эпителий и сывороточный альбумин Can f 3.

Эпителий животных с диагностической целью получают путем соскабливания эпителиального слоя кожи.

Аллергия может возникать как при прямом контакте с этим аллергеном, так и при косвенном, например, вдыхание аллергенов с частичками пыли. Так же эпителий животных может переноситься с обувью и одеждой человека, поэтому аллергены присутствуют даже в тех местах, в которых никогда не было животных (офисы, больницы, школы, и т.д.). Именно поэтому люди, которые чрезмерно чувствительные к эпителию кошек, собак и т.д., могут страдать от данной аллергии, даже не имея малейшего контакта с ними.

Аллергены пыльцы полыни и пищевые аллергены растительного происхождения

Перекрестные реакции между пыльцой и пищей встречаются как у пациентов с чувствительностью к пыльце трав и деревьев, так и у пациентов с пищевой аллергией. У пациентов с респираторной аллергией кросс-реактивность между пыльцевыми и пищевыми аллергенами может вызывать пищевую аллергию с симптомами различной тяжести при употреблении в пищу сырых фруктов и овощей, в то время как у пациентов с пищевой аллергией наблюдается высокий риск одновременного проявления симптомов аллергического ринита и астмы. Молекулярная диагностика позволяет определять специфические IgE к аллергокомпонентам у полисенсибилизированных пациентов, что крайне важно для выявления истинной аллергии.

Разнообразие перекрестных реакций пыльца-пища

Клинические проявления сенсибилизации к перекрестно-реагирующим пыльцевым и пищевым аллергокомпонентам описаны для многих источников растительного происхождения. Перекрестные реакции между пыльцой и пищей описаны для таких аллергенов как береза-яблоко, сельдерей-полынь-специи, полынь-персик, полынь-горчица, амброзия-арбуз-банан, лебеда-дыня.

В основе реакций сельдерей-полынь-специи лежит респираторная сенсибилизация к полыни и перекрестные реакции к растительной пище на такие продукты как сельдерей, морковь, петрушку, семена тмина, фенхеля, кориандра, аниса, паприку, лук, чеснок, лук-порей, перец.

Наблюдаются перекрестные реакции полынь-горчица при аллергии к полыни и пищевой аллергии к предствителям семейства Крестоцветные: горчица белая, горчица русская, капуста кочанная, капуста брокколи, цветная капуста. Возможны случаи аллергических реакций на семена подсолнечника, ассоциированные с аллергией к пыльце полыни.

Описаны клинические случаи тяжелых аллергических реакций на мед и маточное молочко у пациентов с аллергией на полынь и амброзию. Причина таких реакций в том, что продукты пчеловодства могут содержать как пыльцу растений опыляемых насекомыми, так и пыльцу ветроопыляемых растений.

Компоненты пыльцы полыни

Сенсибилизация к компоненту Art v 1 пыльцы полыни варьирует от 70 до 95% среди пациентов с аллергией на полынь, что делает этот белок основным аллергеном. Определение иммуноглобулинов класса E к Art v 1 позволяет прогнозировать эффективность аллерго-специфической иммунотерапии и предполагать наличие перекрестных реакций. Гомологичные аллергены представлены в пыльце амброзии и подсолнечника.

Липид-переносящие белки (LTP, lipid transfer proteins), которые встречаются в пыльце растений и фруктах, вовлечены в перекрестные реакции между этими двумя источниками аллергенов. Пыльцевые LTP описаны как аллергены в 6 различных растениях (амброзии, полыни, японском кедре, оливе, платане и постеннице) и могут вызывать не только респираторные симптомы, но и симптомы пищевой аллергии. Исследования показывают связь между сенсибилизацией к компоненту пыльцы полыни Art v 3 и аллергическими реакциями на фрукты семейства Розоцветные, например персик. Белок Art v 3 является важным диагностическим маркером пищевой аллергии, поскольку аминокислотная последовательность этого аллергокомпонента и липид-переносящего белка персика Pru p 3 совпадает более чем на 40%. Гомологичность этих аллергенов лежит в основе кросс-реактивности полынь-персик.

С развитием молекулярной диагностики и описанием молекулярных особенностей пищевых аллергенов, появились данные о кросс-реактивности между различными источниками аллергенов. Понимание аллергических реакций, связанных с перекрестной активностью аллергенов, крайне необходимо врачу аллергологу. Это позволяет клиницистам обеспечить соответствующий подход к лечению и профилактике аллергии, оценить виды и тяжесть аллергических реакций. Пациенты с аллергией на определенные компоненты пыльцы и пищевых продуктов должны быть тщательно проинформированы о возможных аллергических реакциях. Рекомендации по соблюдению диеты и отказа от продуктов питания, имеющих потенциально кросс-реактивные белки, должны даваться в соответствии с учетом риска перекрестных реакций.

Компонент-специфическая аллергодиагностика является методом исследования, который дает возможность различать перекрестные реакции, происходящие после приема пищи у пациентов с пищевой аллергией. Использование молекулярной диагностики аллергии улучшает понимание роли клинически значимых кросс-реактивных компонентов в аллергии на пыльцу и продукты питания.

Аллергокомпоненты пыльцы тимофеевки

Пыльца растений является основной причиной IgE-опосредованных аллергических заболеваний по всему миру. Тимофеевка луговая (Phleum pratense) — одна из самых широко распространенных трав и важнейший источник пыльцевых аллергенов. До 20% пациентов с аллергией по всему миру сенсибилизированы к тимофеевке и родственным видам трав.

Компоненты пыльцы тимофеевки

Пыльца тимофеевки состоит из различных аллергенных компонентов (Phl p 1, Phl p 2, Phl p 4, Phl p 5, Phl p 6, Phl p 7, Phl p 11 and Phl p 12), среди которых есть как видоспецифичные, так и перекрестно-реагирующие аллергенные молекулы. Мажорным аллергеном является Phl p 1, который относится к семейству пыльцевых аллергенов с названием «группа I». Эта группа содержит аллергены таких перекрестно-реагирующих растений как райграс, ежа сборная, овсяница, колосок душистый. Количество пациентов с аллергией к тимофеевке и чувствительностью к аллергенам группы I насчитывает от 70 до 100% в различных странах Европы. Из-за широкого распространения и высокой кросс-реактивности аллергенов группы I, наличие IgE к Phl p 1 можно использовать как диагностический маркер аллергии на пыльцу трав.

Ещё одной большой группой аллергенов пыльцы трав является группа V, на аллергены которой реагируют от 60 до 93% пациентов. К группе V относится аллерген тимофеевки Phl p 5, вызывающий аллергические и астматические проявления у 90% пациентов.

Phl p 1 и Phl p 5 охарактеризованы как мажорные, видоспецифичные белки, тогда как Phl p 12 и Phl p 7 описаны как минорные, перекрестно-реагирующие.

Phl p 7 относится к семейству кальций-связывающих белков. Антитела против белков этого семейства обнаруживаются по различным данным у 5–10% пациентов с пыльцевой аллергией и отвечают за перекрестные реакции между пыльцой растений. Пациенты со специфическими IgE к белкам этого семейства демонстрируют полисенсибилизацию к пыльце трав и деревьев. Одним из родственных Phl p 7 белков является аллерген пыльцы березы Bet v 4.

Компонент пыльцы тимофеевки Phl p 12 относится к профилинам. Это крайне консервативные молекулы с большим числом гомологов, отвечающие за кросс-реактивность между различными видами растений. Количество пациентов в Европе с IgE к профилинам колеблется от 8 до 15%. Phl p 12 может давать перекрестные реакции с профилинами пыльцы растений (олива европейская, свинорой пальчатый, постенница, подсолнечник однолетний, береза бородавчатая, финик пальчатый) и растительной пищи (банан, ананас и другие экзотические фрукты). Пациенты, имеющие антитела как к основным, так и к кросс-реагирующим аллергокомпонентам тимофеевки, чаще реагируют с проявлениями анафилаксии, крапивницы и отеком Квинке на арахис, томат и фрукты.

Прогноз эффективности АСИТ

Определение профиля сенсибилизации к аллергенным молекулам позволяет прогнозировать эффективность аллерген-специфической иммунотерапии (АСИТ). АСИТ будет эффективной в случае наличия специфических IgE к мажорным компонентам (Phl p 1 и Phl p 5) и отсутствии к минорным (Phl p 12 и Phl p 7). В случае наличия специфических IgE как к мажорным, так и к минорным компонентам, эффективность будет средней. АСИТ будет малоэффективна в случае отсутствия IgE к мажорным компонентам Phl p 1 и Phl p 5.

Кочиш Людмила Тихоновна, руководитель лаборатории аллергологии ООО «Вега» ГК Алкор Био

In vitro исследования это

Источник: www.RusNanoNet.ru


Добавить комментарий